(一)原理
葡萄糖一6一磷酸酶(glucose-6-phosphatase)是滑面內質網的標志酶。葡萄糖6一磷酸酶是糖異生途徑的關鍵酶,其轉錄的多少,決定著糖異生的速度。ELISA試劑盒
(二)材料
1.標本組織切片。
2.Tris一馬來酸緩沖液(pH6.5)
(1)A液:取Tris1.2g、馬來酸1.16g,溶于100ml蒸餾水中。
(2)B液:0.2mol/LNaOH溶液(將0.8gNaOH溶于lOOml蒸餾水即成)。取A液25ml,B液約20ml,調pH至6.5后,加蒸餾水至100ml。
3.工作液須于用前現配,如有沉淀,應過濾。其配制方法為:0.125%D一葡萄糖一6一磷酸鈉鹽或鉀鹽20ml,0.2mol/L Tris一馬來酸緩沖液(pH 6.5)20ml,3%醋酸鉛3ml,蒸餾水7ml。
4.0.1mol/L磷酸緩沖液(含3%多聚甲醛)。ELISA試劑盒
(三)方法
1.用含3%多聚甲醛的o.1mol/L磷酸緩沖液于4℃固定組織切片標本2min。
2.用蒸餾水洗5次,各2min。
3.置于工作液中,37℃孵育15~20min。
4.用蒸餾水洗2次,各2min。
5.其余步驟同酸性磷酸酶染色步驟7~10。
6.對照設立對照的方法有兩種:①在作用液中不加反應底物。②用口甘油磷酸鈉代替底物。
(四)結果
酶活性部位有棕黑色沉淀,對照標本無此沉淀。ELISA試劑盒