染色結果的觀察
1、陽性結果應定位在細胞相應的部位,在細胞膜表達的抗原陽性結果應定位在細胞膜上,在其他部位的陽性反應均為非特異性染色。不當的抗原修復會導致抗原在組織細胞中定位的改變。根據所檢測抗原的不同,抗原分別定位在:
(1)細胞膜:如LCA和CD3、CD20等;
(2)細胞質:如Cytokeratin 、GFAP、S100 、CgA、AFP等;
(3)細胞核:如Ki-67、ER、PR、TTF-1、HPV-Ag、Cyclin D1、TDT等。
2、組織的周邊、氣泡、刀痕、皺折等部位往往呈現非特異性陽性表達。
3、染色結果呈陰性并非都是抗原不表達,要考慮是否與組織中的抗原受到破壞有關。
4、組織切片背景深與下列因素有關:
(1)石蠟切片脫蠟不干凈;
(2)*抗體濃度過高或孵育時間過長,溫度過高;
(3)顯色劑DAB濃度過高或H2O2太多;細胞
(4)抗體不純;
(5)抗體孵育后切片清洗不干凈。